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SuperScript IV逆转录试剂盒基于第IV代定向进化M-MLV （Moloney Murine Leukemia Virus，莫洛尼鼠白血病病毒）逆转录酶开发，可高效合成cDNA，尤其适用于低模板、低表达或部分降解的RNA样本。试剂盒含5×gDNA digester Mix，可彻底去除残留基因组DNA，无需跨内含子设计引物；4×Super qRT Mix集成全部反应组分，简化操作流程。逆转录产物兼容染料法与探针法qPCR。
组分 | 20次反应 | 50次反应 |
5×gDNA digester Mix | 60 μL | 150 μL |
4×Super qRT Mix | 100 μL | 250 μL |
RNase-free ddH₂O | 1 mL | 2.5 mL |
注：4×Super qRT Mix包含Super IV逆转录酶、RNase抑制剂、dNTP Mix、随机引物/Oligo (dT)20 VN混合引物。
适用于动物、植物、微生物RNA的逆转录，产物可直接用于染料法或探针法qPCR。
保存：-80℃或-20℃避光保存（有效期24个月）。
运输：≤0℃冰袋运输。
1. RNase残留检测：2 μg酶与293T RNA 37℃孵育30分钟，琼脂糖凝胶电泳显示RNA无降解。
2. 大肠杆菌DNA残留：0.5 μg酶中E.coli基因组残留＜10拷贝（TaqMan qPCR检测）。
耗材：RNase-free吸头、1.5 mL离心管、0.2 mL PCR管。
仪器：移液器、PCR仪、冰盒。
试剂：高纯度RNA样本（推荐浓度：20 ng/μL–1 μg/μL）。
1. 按以下体系配制反应液：
组分 | 体积 |
RNA模板（1 pg–1 μg） | X μL |
5×gDNA digester Mix | 3 μL |
RNase-free ddH₂O | 补至15 μL |
2. 轻柔混匀，42℃孵育2分钟。
1. 直接向步骤1的混合液中加入4×Super qRT Mix：
组分 | 体积 |
步骤1反应液 | 15 μL |
4×Super qRT Mix | 5 μL |
2. 轻柔混匀，按以下程序运行：
温度 | 时间 |
42℃ | 5 min |
85℃ | 5 s |
立即用于qPCR，或-20℃保存（6个月内使用）；长期保存需分装于-70℃。
注意：避免反复冻融。
1. RNA加样量超限
单次反应推荐≤1 μg总RNA；若目标基因低表达，可增至5 μg，但需验证qPCR线性范围。
2. cDNA使用比例
qPCR模板中cDNA体积不超过总反应体积的1/10（如20 μL体系加≤2 μL）。
3. 省略基因组去除步骤
若无需去除gDNA，可直接用4×Super qRT Mix配制逆转录体系。
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