DNA凝胶回收试剂盒

产品简介

本试剂盒适用于从琼脂糖凝胶中回收多至10 μg DNA（80 bp~10 kb），回收率可达65~85%。琼脂糖凝胶在高离序盐中（QBN）溶解后，DNA片段选择性吸附于离心柱内的硅基质膜上。回收后的DNA纯度高，并能保持片段完整性和高生物学活性，可直接用于测序、连接、PCR扩增、体外转录等分子生物学实验。

产品信息

规格（50次）  货号：QE035-S

规格（200次） 货号：QE035

保存条件

常温（15~30℃）干燥条件下保存15个月。

产品特点

快速：胶块无需称重，操作简便；

高效：回收效率高，获得的目的DNA纯度高；

适用性广：一盒两用，可用于DNA片段凝胶回收及PCR产物直接回收等。

适用范围

本品适用于PCR产物直接回收、DNA片段的凝胶回收、酶切产物的凝胶回收等。

使用方法

Ⅰ、PCR产物直接回收

1. 按照PCR原液：QNB=1：3的比例加入QNB（不少于150 μL）后吸打混匀（如：在1.5 mL离心管中，50 μL PCR原液加入150 μL QNB后吹打混匀）；

直接进入步骤4。

Ⅱ、从琼脂糖凝胶中回收

1. 在365 nm长波紫外灯下，用干净刀片将目的条带切下，尽量切除不含目的DNA条带，得到凝胶体积越小越好（切胶时，为避免紫外照射时间过长对DNA造成损伤，建议快速切胶）；

2. 将含有目的DNA条带的凝胶放入2 mL离心管中，加入500 μL的QBN（若胶块过大，适当添加QBN至溶液呈淡黄色）；

3. 65℃水浴4~6 min，每2~3 min上下颠倒混匀一次至凝胶完全融化，溶液呈淡黄色；

4. 将溶液转入吸附柱中，12,000 ×g离心1 min，弃废液，将吸附柱放回空收集管；

5. 在吸附柱中加入600 μL BW1（请先检查是否已加入指定体积的无水乙醇），12,000 ×g离心1 min，弃废液；

注意：如果回收的DNA是用于克隆实验或直接测序等，建议BW1加入后静置2~5 min再离心。

6. 重复步骤5一次；

7. 将吸附柱放回空收集管中，12,000 ×g离心2 min；

8. 取出吸附柱，置于干净的1.5 mL离心管中，室温开盖静置2 min，在吸附膜的中间部位加35~50 μL EB（60~65℃预热EB效果更好），室温放置2 min，12,000 ×g离心2 min。如需较多量DNA，可将得到的溶液重新转入吸附柱中，离心2 min。

注意：洗脱体积越大，洗脱得率越高。若需得到较高浓度的DNA，可以适当减少洗脱体积，但最小体积应不少于25 μL，体积过小会降低DNA洗脱得率，降低产量。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH₂O洗脱，保证pH值在7.0~8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20°C以防DNA降解。

注意事项

1. WB1使用前加入指定量的无水乙醇，各溶液使用后请及时将盖子拧紧；

2. 若回收凝胶中的DNA片段，电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果；

3. 建议使用高质量的琼脂糖，以免其中杂质影响下游连接等实验；

4. QNB中含刺激性溶液，操作时要戴乳胶手套和眼镜；

5. 回收产物可通过琼脂糖电泳或分光光度计检测是否回收成功。使用分光光度计时，若使用EB进行洗脱，建议使用EB进行校准。

常见问题与解决办法

Q1：DNA回收率低 ？

A1：

1) 琼脂糖凝胶未完全溶化。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖，溶胶时多次上下颠倒使凝胶充分溶化，确保无固体琼脂糖残留；

2) 胶块过大造成溶胶后溶液PH较高，吸附效率低。若胶块过大，适当添加QBN至溶液呈淡黄色；

3) 试剂准备有误。BW1需按照瓶身标示加入指定体积的无水乙醇；

4) 洗脱效率低。将EB预热至60~65℃，并进行二次洗脱。

Q2：纯化后的DNA下游结果不理想？

A2：

1) 盐离子残留。确保用BW1洗脱两次，此外沿吸附柱管壁四周加入BW1，或加入BW1后颠倒混匀2 ~3次有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐离子；

2) 琼脂糖残留。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖，多次上下颠倒使凝胶充分溶化，确保无固体琼脂糖残留。